文章目录

1 材料

1.1 主要仪器

1.2 主要药品与试剂

1.3 动物

2 方法

2.1 DOT对DIED模型大鼠的防治作用考察

    2.1.1 造模、分组与给药

    2.1.2 指标检测

2.2 MCECs的分离、培养

2.3 MCECs的纯度鉴定

2.4 DOT对高糖损伤MCECs活力的影响

2.5 MCECs中总RNA提取及c DNA文库构建

2.6 MCECs差异表达基因筛选及功能富集分析

2.7 关键基因的表达情况验证

2.8 统计学方法

3 结果

3.1 DOT对DIED模型大鼠的防治作用考察结果

    3.1.1 体质量、FPG值、FINS和IR测定结果

3.2 MCECs的纯度测定结果

3.3 DOT对高糖损伤MCECs活力的影响考察结果

3.4 MCECs的c DNA文库测序数据评估结果

3.5 MCECs的差异表达基因筛选及功能富集分析结果

    3.5.1差异表达基因筛选结果

    3.5.2 GO功能富集分析结果

    3.5.3 KEGG通路富集分析结果

    3.5.4 DOT对高糖损伤MCECs的多靶点调控分析结果

3.6 MCECs差异表达基因的验证结果

4 讨论

文章摘要:目的:研究山药蛋白（DOT）防治糖尿病性勃起功能障碍（DIED）的潜在作用机制。方法:采用高糖高脂饲料+腹腔注射链脲佐菌素（40 mg/kg）的方法复制DIED大鼠模型。实验设置正常对照组（生理盐水）,模型组（生理盐水）,DOT低、中、高剂量组（0.3、0.6、0.9 mg/kg）和西地那非组（阳性对照,4.4 mg/kg）,每组9只大鼠。在糖尿病模型已建立成功、开始诱导DIED发生的阶段,各组大鼠开始灌胃相应溶液,每天1次,连续11周。测定大鼠体质量、空腹血糖（FPG）值、勃起次数、勃起率、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（IR）以及阴茎海绵体组织中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、环磷酸鸟苷（c GMP）含量,以评价DOT对DIED模型大鼠的干预作用。选择30 mmol/L葡萄糖诱导48 h建立高糖损伤小鼠海绵体内皮细胞（MCECs）模型,并给予125、250、500μg/mL DOT进行干预,然后检测细胞活力,以评价DOT对高糖损伤MCECs的影响。继而采用转录组测序技术分别筛选正常MCECs与高糖损伤MCECs、高糖损伤MCECs与250μg/mL DOT处理的MCECs中的差异表达基因,对差异表达基因进行基因本体（GO）功能富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;分析两组细胞间共同的差异表达基因,并选择6个关键基因在mRNA水平上进行验证。结果:不同剂量DOT对DIED模型大鼠体质量降低、FINS和IR升高、勃起次数减少、勃起率降低以及阴茎海绵体组织中eNOS、cGMP含量降低均有不同程度的逆转作用,其中高剂量DOT作用后DIED模型大鼠的上述指标变化均被显著逆转（P<0.05或P<0.01）。125、250、500μg/mL DOT均可显著提高高糖损伤MCECs的活力（P<0.05或P<0.01）。转录组测序结果表明,与正常MCECs比较,高糖损伤MCECs中共有48个差异表达基因;与高糖损伤MCECs比较,DOT处理的MCECs中共有779个差异表达基因;两组差异表达基因在生物学过程注释中均以细胞过程为主、在细胞组分注释中均以细胞部分为主、在分子功能注释中均以绑定分子功能为主,并主要富集在细胞外基质受体相互作用通路、错配修复通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路等。在两组差异表达基因中,共得到Aldh1a1、Abcc5、Tac1等13个共同的差异表达基因,DOT均可显著回调高糖损伤MCECs中上述共同差异表达基因的表达。经验证,DOT可以显著逆转高糖损伤MCECs中关键基因TGF-β3、Txnip、Aldh1a1、Loxl1、Mt1、Mt2的mRNA表达。结论:DOT对DIED模型大鼠的症状具有改善作用;其作用机制可能与抑制纤维化、降低氧化应激等生物学途径,从而改善海绵体内皮功能有关。

文章关键词:

论文分类号:R285.5

文章来源：《实用糖尿病杂志》 网址: http://www.sytnbzz.cn/qikandaodu/2021/1214/1675.html

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